Induction of castration by immunization of male dogs with recombinant gonadotropin-releasing hormone (GnRH)-canine distemper virus (CDV) T helper cell epitope p35

Immunocastration is a considerable alternative to a surgical castration method especially in male animal species for alleviating unwanted male behaviors and characteristics. Induction of high titer of antibody specific for gonadotropin-releasing hormone (GnRH) correlates with the regression of testes. Fusion proteins composed of canine GnRH and T helper (Th) cell epitope p35 originated from canine distemper virus (CDV) F protein and goat rotavirus VP6 protein were produced in E. coli. When these fusion proteins were injected to male dogs which were previously immunized with CDV vaccine, the fusion protein of GnRH-CDV Th cell epitope p35 induced much higher antibody than that of GnRH-rotavirus VP6 protein or GnRH alone. The degeneration of spermatogenesis was also verified in the male dogs immunized with the fusion protein of GnRH-CDV Th cell epitope p35. These results indicate that canine GnRH conjugated to CDV Th cell epitope p35 acted as a strong immunogen and the antibody to GnRH specifically neutralized GnRH in the testes. This study also implies a potential application of GnRH-based vaccines for immunocastration of male pets.

Immunochemical characterization and antifertility effect of an androgen independent antigen of spermatozoa identified by a monoclonal antibody (D7G3).

Monoclonal antibody, (mAb) D7G3, directed to human spermatozoa and cross-reactive with mouse and rat spermatozoa was found to be a sperm agglutinating antibody. It reacted with antigen present on the post acrosomal region of human spermatozoa and acrosomal region of mouse spermatozoa. The antigen reacting with mAb D7G3 was localized in mouse testicular germ cells and Sertoli cells. It was also localized in the epithelium and spermatozoa of the caput, corpus and cauda epididymides. In addition, the antigen was detected in the epithelial cells and secretions of the prostate and seminal vesicle. The mAb D7G3 reacted with a band of molecular mass 16 kDa in testicular and epididymal sperm and protein preparations of ventral prostate. In the seminal vesicle, an additional band of molecular mass 36 kDa was also identified. The effect of castration on the expression of proteins was studied in the rat. Immunohistochemical localization and Western blotting experiments showed that the antigens identified by the mAb D7G3 was detectable in the epididymis, ventral prostate and seminal vesicle after two weeks of castration. In the seminal vesicle, three additional bands were identified by mAb D7G3 following castration. The expression of this antigen throughout spermatogenesis and sperm maturation indicated that it may have an important biological function. A polyclonal antiserum directed to the 16 kDa mouse epididymal sperm protein was raised in rabbits. Passive immunization of female mice with this antibody caused a significant reduction in fertility only if administered 24 hours prior to mating, indicating that the antibody inhibited a pre-fertilization event by inhibiting sperm function.

Cinética de la respuesta esteroidogénica a la estimulación testicular con gonadotrofina coriónica: aplicación clínica en hombres con infertilidad asintomática / Kinetics the steroidogenic response to the testicular stimulation whit gonadotrophin chorionic: clinical application in asymptomatic infertile man

En el presente trabajo, hemos desarrollado una prueba de estimulación testicular simplificada y de aplicación clínica. Además, se correlacionó la respuesta esteroidogénica a la hCG, con las alteraciones espermatogénicas en hombres con infertilidad asintomática. Los niveles circulantes de testosterona (T), estradiol (E2), 17OH-Progesterona (17OHP) fueron determinados en condiciones basales (3 muestras de sangre tomadas en intervalos de 15 min) y a las 2, 4, 24 y 48 h después de la inyección i.m. de 5.000 UI de hCG, en 420 pacientes oligoastenospérmicos normoprolactinémicos con niveles normales de LH y FSH. Las respuestas de T y 17OHP a la hCG, en el grupo control, mostraron un patrón bifásico con un pico agudo a las 4 h y un pico más sostenido y retrasado luego de las 24 h. Los pacientes infértiles mostraron 2 tipos de respuesta de la T a la hCG: grupo 1) (n = 290), con una respuesta disminuida entre las 2 y 4 h, pero en el rango de los valores de los hombres normales entre las 24 y las 48 h, y un grupo 2 (n = 130) con una respuesta de T similar al grupo control. Las respuestas de E2 en los pacientes del grupo 1 y 2 fueron similares a las del grupo control. La hCG indujo un crecimiento significativo en la relación 170HP/T en los pacientes del grupo 1. En 22 pacientes: 16 del grupo 1 y 6 del grupo 2, se administró aminoglutetimida-hidrocortisana (AGT-HC), un inhibidor de la aromatasa, durante 90 días. Díez pacientes del grupo 1 normalizaron el espermograma (5 de los cuales lograron embarazos, en 5 se obtuvo un incremento significativo de los espermatozoides grado 3 y en 1 no se observaron cambios. Por otro lado, sólo 1 paciente del grupo 2 presentó una leve mejoría en la calidad del semen. La AGT disminuyó la concentración de E2 y aumentó las gonadotrofinas y la relación T/E2. En los pacientes del grupo 1 se incrementó la respuesta aguda de T a la hCG, durante el tratamiento. Nuestros resultados sugieren que 1), el E2 podría estar involucrado, tanto en la etiología de algunos casos de oligoazoospermia, como en la falta de respuesta aguda de T a la hCG, induciendo, posiblemente, un bloqueo parcial de la 17,20 desmolasa; 2) la mejoría de la calidad del semen inducida por el AGT-HC podría estar relacionada a un incremento en la relación T:E2, a una disminución intratesticular de E2, a un incremento de gonadotrofinas o a la suma de cambios hormonales; 3) solamente los pacientes con una respuesta aguda disminuidas de T a la hCG serían posibles para el tratamiento

Correlation of immune complexes with serum cytotoxic activity induced by antisperm cytophilic antibodies

En trabajpos previos (1) demostramos la presencia de anticuerpos citofilicos antiespermáticos (ACA) en suero de cobayos con orquitis inmunológica experimental, encontrándose una estrecha relación entre lesión testicular y ACA. Dichos ACA fueron asilados mediante elución de la superficie de macrófagos, demosntrando su naturaleza de IgG2 (12). Este trabajo tiene por objeto estudiar la capacidad citotóxica tanto in vitro, como in vitro, de ACA extraídos (HE) de sueros provenientes de cobayos con alto título de ACA (HS). Asimismo, en dichos sueros se investigó la presencia de complejos inmunes circulantes (CIC). Se demostró citotoxicidad in citro sobre: a) células germinales aisladas de tésticulo normal (Tabla 1) incubadas con HS (1/32) y con el anticuerpo aislado HE (1/128); b) espermatozoides (Tabla 1) incubados con HE (1/64). Se demostro citotoxicidad in vivo (Tabla 2) mediante el estudio histológico de testículos de cobayos normales a los cuales se inyecto HS y HE en el espacio subalbugineo. Con HS se hallo intensa orquitis desde el primer día post-inyección. Con HE las lesiones testiculares se observaron a partir del día 7. La incubación in vitro o la inyección en el espacio subalbugíneo utilizando suero normal o fracción citofgílica aislada de suero normal no demostratron citotoxicidad en ningún caso. La presencia de CIC se investigó ne HS mediante: 1) la técnica de combinación 125I-C1q(19), con la cual no se obtuvieron datos significativos en relación al suero normal (Tabla 3); 2) el test de precipitación de polietilenglicol (4) el cual permitió detectar nivelles elevados de CIC en HS (Tabla 4). Estos hallazgos sugieren que los ACA poseen actividad citotóxica sobre el tejido testicular. Esta citotoxicidad podría estar relacionada con los CIC precipitables con polietilenglicol

Immunologic response of guinea pigs (Cavia porecellus) by treatment with antithymocyte serum, gamma-irradiation of gastrointestinal tract, lymphoid tissue and bone marrow.

The immunologic status of the guinea pigs was modified by treatment with antithymocyte serum (ATS): irradiation of gastrointestinal tract lymphoid tissue (GALT) and bone marrow (BM) by gamma-rays. These animals were injected with homologous testes, kidney and heterologous sheep red blood cells respectively in complete Freund's adjuvant. Cell mediate immune response (CMI) and humoral immune response was studied after first, third, fifth and eighth week of allergization. CMI was completely suppressed in guinea pigs treated with ATS, whereas humoral response suppressed to a lesser extent. In GALT and BM irradiated guinea pigs, CMI develops normally. However, marked suppression in the production of antibody titre both against homologous testes, kidney and heterologous sheep red blood cells was observed. Thymic lymphocytes "T' are destroyed by antithymocyte serum which are the mediators of cell mediated immune response. Irradiation of GALT and BM suppresses humoral response thereby supports that these are populated by "B' lymphocytes.